纸层析氨基酸层析液（氨基酸纸层析法结果分析）

本文目录一览：

• 1、纸层析法分析氨基酸结果
• 2、氨基酸纸层析的原理是什么
• 3、纸色谱法鉴定氨基酸怎么操作？谢谢！
• 4、纸层析法分离鉴定氨基酸的注意事项
• 5、大学实验氨基酸纸层析影响因素有哪些
• 6、纸层析法 氨基酸Rf值的计算方法是怎样的？

纸层析法分析氨基酸结果

氨基酸的分离鉴定——纸层析法

一,实验目的

掌握氨基酸纸层析的方法和原理,学会分析待

测样品的氨基酸成分.

二,实验原理

纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析.滤纸纤维上的羟基具有亲水性,吸附一层水作为固定相,有机溶剂为流动相.当有机相流经固定相时,物质在两相间不断分配而得到分离.

溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示:

Rf=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离

在一定的条件下某种物质的Rf值是常数.Rf值的大小与物质的结构,性质,溶剂系统,层析滤纸的质量和层析温度等因素有关.本实验利用纸层析法分离氨基酸.

三,实验器材

(1)大烧杯(5000mL):1只/组

(2)微量注射器(100

L):1只/

组.

(3)喷雾器:公用.

(4)培养皿:1只/组.

(5)层析滤纸(长22cm,宽14cm的新华一号滤纸):1张/组.

(6)直尺,铅笔:自备.

(7)电吹风:1只/组.

(8)托盘,针,白线:1套/组.

(9)手套:1双/组.

(10)塑料薄膜:公用.

(11)小烧杯:50mL,1只/组.

四,实验试剂

(1)扩展剂:将4体积正丁醇和1体积冰醋酸放入分液漏斗中,与5体积水混合,充分振荡,静置后分层,弃去下层水层.

(2)氨基酸溶液:0.5%的已知氨基酸溶液3种(赖氨酸,苯丙氨酸,缬氨酸),0.5%的待测氨基酸液1种.

(3)显色剂:0.1%水合茚三酮正丁醇溶液.

实验试剂

五,实验操作

检查培养皿是否干燥,洁净;若否,将其洗净并置于干燥箱内120℃烘干.

(1)平衡:剪一大块塑料薄膜铺在桌面上,将层析缸或大烧杯到置于塑料薄膜上,再把盛有约20mL展层溶液的小烧杯置于倒置的层析缸或大烧杯中,用塑料薄膜密封起来,平衡20min.

(2)规划:带上手套,取宽约14cm,高约22cm的层析滤纸一张.在纸的下端距边缘2cm处轻轻用铅笔划一条平行于底边的直线A,在直线上做4个记号,记号之间间隔2cm,这就是原点的位置.另在距左边缘1cm处画一条平行于左边缘的直线B,在B线上以A,B两线的交点为原点标明刻度(以厘米为单位),参见左图.

(3)点样:用微量注射器分别取10mL左右的氨基酸样品(每取一个样之前都要用蒸馏水洗涤微量注射器,以免交叉污染),点在这四个位置上.挤一滴点一次,同一位置上需点2～3次,2～3mL/次,每点完一点,立刻用电吹风热风吹干后再点,以保证每点在纸上扩散的直径最大不超过3mm.每人须点4个样,其中3个是已知样,1个是待测样品.

(4)层析:用针,线将滤纸缝成筒状,纸的两侧

边缘不能接触且要保持平行,参见图3-3.向培养皿中加入扩展剂,使其液面高度达到1cm左右,将点好样的滤纸筒直立于培养皿中(点样的一端在下,扩展剂的液面在A线下约1cm),罩上大烧杯,仍用塑料薄膜密封.当扩展剂上升到A线时开始计时,每隔一定时间测定一下扩展剂上升的高度,填入表3-1中.当上升到15～18cm,取出滤纸,剪断连线,立即用铅笔描出溶剂前沿线,迅速用电吹风热风吹干.

(5)显色:用喷雾器在通风厨中向滤纸上均匀喷上0.1%茚三酮正丁醇溶液,然后立即用热风吹干,即可显出各层析斑点,参见左图.

(6)计算各种氨基酸的Rf值,并判断混合样品中都有哪些氨基酸,各人将自己的实验结果贴在实验报告上,见表3-2.

(7)以层析时间为横坐标,扩展剂上升高度为纵坐标画图,求出扩展剂上升到18cm时所需要的时间.

(8)将微量注射器内外用蒸馏水清洗干净,倒掉用过的展层液和平衡液,将培养皿洗净,整理好桌面上的仪器和试剂.

氨基酸纸层析的原理是什么

纸层析法（paper chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。在层析时，将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数（Kd）不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用比移值（rate of flow, Rf）来表示。所谓Rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值：

在一定条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。

纸色谱法鉴定氨基酸怎么操作？谢谢！

纸色谱法是属于分配色谱的一种，通常用特制的滤纸如新华一号滤纸作为固定相（水的支持剂），含有一定比例的水的有机溶剂（展开相）作流动相，应用于多官能团或高极性化合物如糖或氨基酸的分离、鉴定。

Rf比移值是一个特定常数。Rf值随被分离化合物的结构、固定相与流动相的性质、温度等因素不同而异。当温度、滤纸等实验条件固定时，它是一个常数。这也就是用纸色谱进行定性分析的依据。

用标准氨基酸作出纸色谱和Rf值，与在相同条件下作出的混合物的纸色谱和Rf相对照，以达到分离、鉴定氨基酸的目的。当然，在实际应用中，纸上层析的操作要复杂得多。尤其是Rf值相接近的氨基酸需要用两向纸上层析才能达到分离鉴定的目的。

氨基酸经纸上层析后，常用茚三酮显色剂显色。必须注意！指印含有一定量的氨基酸，在实验方法中足以检出（可以检出以微克计的痕迹量）。

纸层析法分离鉴定氨基酸的注意事项

选择合适的滤纸, 点样一定要浓度大范围小, 不要使层析液没过点样点

大学实验氨基酸纸层析影响因素有哪些

影响氨基酸纸层析的因素有：

温度，层析液，

样品的浓度等

纸层析法 氨基酸Rf值的计算方法是怎样的？

溶剂从原点渗透到距离a（一般在20—30厘米时测定）的时候，如果位于原点的物质从原点向前移动到b，那么b/a的值（0.0—1.0）就是这种物质的Rf值。

例如：把葡萄糖和果糖在20℃下于正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5）中展开，可分别得到0.18、0.23的Rf值，在醋酸乙酯-吡啶-水（2∶1∶1）中展开，则分别得到0.28、0.32的Rf值。若滤纸、溶剂温度等保持恒定，则各种物质呈现特定的Rf值，成为鉴定物质的极重要的常数。

扩展资料

做此实验时，有如下注意点：

1、层析液放入适量，标准是保持层析过程既不挥发完（因此层析过程最好盖住），也不没刻线。

2、层析时间不应太长，否则使一种液体爬到最高处就不能测其Rf，最好实验前做一小测试判断液体爬到最高处的时间。

3、层析完后尽快用铅笔画出区域（为圆形），防止颜色褪掉。等测量时，测量刻线到圆心的距离，按照公式即可。

参考资料来源：百度百科-RF值

参考资料来源：百度百科-纸层析法